Стафилококки — возбудители пищевых токсикозов

Стафилококки — возбудители пищевых токсикозов

Курсовая работа

"Стафилококки - возбудители пищевых токсикозов"

Москва 2006

Введение

Продукты убоя животных при определенных условиях могут быть источником возникновения не только типичных инфекционных и инвазионных болезней у людей (сибирская язва, туберкулез, бруцеллез, тениаринхоз, тениидоз и др.), но и различных пищевых заболеваний, к которым относят токсикоинфекции и токсикозы. Токсикоинфекции и токсикозы представляют собой обширную группу преимущественно острых пищевых заболеваний людей. Само название «пищевые заболевания», «пищевые токсикоинфекции», «пищевые токсикозы» указывают, что основную роль 'в их возникновении играют пищевые продукты. Однако возможное вредное влияние пищевых продуктов на организм человека может быть обусловлено различными причинами. В зависимости от них все пищевые заболевания людей делят на две большие группы.

Пищевые заболевания бактериального или микробного происхождения.

В соответствии с современной классификацией, утвержденной в 1981 году Минздравом СССР, пищевые отравления микробной природы разделены на пищевые токсикоинфекции, пищевые токсикозы (интоксикации) и отравления смешанной этиологии (при сочетании пищевой токсикоинфекции и токсикоза).

Пищевые токсикоинфекции - заболевания, вызываемые микроорганизмами в сочетании с токсическими веществами, образующимися в процессе их жизнедеятельности (преимущественно эндотоксинами). Данные микроорганизмы-это бактерии рода сальмонелла, некоторые условно-патогенные бактерии (E. coli, Proteus mirabilis), Cl. perfringens. В. cereus и др.

Пищевыми токсикозами (интоксикациями) называют пищевые отравления, связанные с употреблением в пищу продуктов, в которых накопился экзотоксин в результате жизнедеятельности токсинобразующих микроорганизмов.

После употребления человеком продуктов, содержащих экзотоксин, последний всасывается через желудочно-кишечный тракт в кровь и разносится по всему организму. При этом поражаются в первую очередь сердечнососудистая и центральная нервная системы. Появляются головные боли, головокружение, нарушаются зрение, функции сердечнососудистой системы и др. Позже появляются признаки нарушения функций желудочно-кишечного тракта рвота, диарея, боль в области желудка и др.

Инкубационный период при токсикозах короче, чем при пищевых токсикоинфекциях, и составляет несколько часов.

Возбудителями пищевых токсикозов являются патогенные стафилококки, стрептококки, возбудитель ботулизма и токсигенные грибы. Токсикозы грибного происхождения называют микотоксикозами.

1. Краткая историческая справка и классификация

Среди микроорганизмов, вызывающих пищевые токсикозы, значительная роль принадлежит токсигенным стафилококкам.

Стафилококки впервые выделены из гноя фурункула человека Л. Пастером в 1880 г. Различают сапрофитные, условно-патогенные и патогенные виды стафилококков. Сапрофитные виды содержатся в воздухе, почве, воде, на поверхности растений. Условно-патогенные и патогенные обитают в организме людей и животных: на коже и слизистых оболочках. Патогенные стафилококки часто обусловливают гнойно-воспалительные процессы - маститы, флегмоны, нагноения ран и др. В связи с этим их называют пиогенными или гноеродными. Они также вызывают пищевые токсикозы у людей. Заболевания возникают часто в результате употребления молока и молочных продуктов, содержащих экзотоксины этих микроорганизмов.

Классификация стафилококков была впервые разработана в 1884 г. Розенбахом. На плотной питательной среде были выделены два типа колоний: один тип колоний образовывал желтый пигмент, другой - белый. Долгое время стафилококки ошибочно классифицировали по пигменту. По современной классификации стафилококки относят Их относят к семейству Мicroсоссасеае, роду Staphylococcus, который представлен 28 видами, который включает три вида: золотистый стафилококк (S.aureus) - патогенный; эпидермальный (S. epidermidis) - условно-патогенный; сапрофитический (S. saprophyticus) - непатогенный. Пищевые токсикозы (интоксикации) вызывают S.aureus и S. epidermidis, способные вырабатывать экзотоксин, именуемый энтеротоксином и коагулировать цитратную плазму кролика.

Стафилококки представляют собой круглые клетки (кокки) диаметром 0,8-1 мкм, располагающиеся в виде скоплений, напоминающих виноградные грозди, иногда располагаются в виде коротких цепочек или парными и одиночными клетками. Они неподвижны, спор и капсул не образуют, красятся всеми анилиновыми красителями, грамположительны.

2. Культуральные свойства

Стафилококки - аэробы и факультативные анаэробы. Хорошо развиваются на обычных питательных средах при температуре от 10°С до 43°С (оптимум 30-37°С) при рН - 7,2-7,6. Рост возможен и в слабокислой среде. Стафилококки вызывают диффузное помутнение МПБ с последующим выпадением небольшого осадка. Через 2-3 суток на поверхности бульона образуются пленка и пристеночное кольцо. На МПА стафилококки растут в виде выпуклых, с ровными краями колоний диаметром от 1 до 4 мм. При 20-25°С, доступе кислорода и рассеянном свете стафилококки вырабатывают золотистый, белый, лимонно-желтый, оранжевый и другие пигменты, являющиеся липохромами, каталазоположительны, оксидазоотрицательны. Растут на средах с 5-10% NаС1.

В качестве избирательных сред предложены; желточно-солевой агар, молочно-солевой агар, Чепмена и др. Чаще всего используют среду ЖСА (желточно-солевой агар), позволяющую уже в первичных посевах выявить колонии патогенных стафилококков.

При росте на желточно-солевом агаре вокруг колоний патогенных стафилококков образуются радужные венчики и зоны помутнения. На молочно-солевом агаре колонии стафилококков имеют форму дисков с ровными краями, образующие разнообразные пигменты (золотистый, белый и др.).

Ввиду сходства стафилококков по морфологии и культуральным свойствам, выросшие на питательных средах колонии отвивают на скошенный мясопептонный агар и проводят идентификацию: ставят реакцию плазмокоагуляции (патогенные стафилококки способные коагулировать цитратную кроличью плазму, как правило лизируются фагами), каталазный тест, проводят посевы на углеводные среды с маннитом и др., на МПЖ, проверяют чувствительность к антибиотикам.

Подразделение стафилококков на подвиды или варианты по характеру пигмента имеет второстепенное значение и при санитарно-микробиологических исследованиях не должно приниматься во внимание. Ненадежно также определение патогенных стафилококков по их способности давать гемолиз при росте на кровяном агаре. Гемолитическая способность этих микробов колеблется в широких пределах в зависимости от ряда факторов: вида используемой крови, содержание в ней антигоксина, концентрации эритроцитов в агаре, толщина слоя среды и др. Поэтому гемолитический признак на практике не обеспечивает дифференциацию гноеродных (патогенных) стафилококков от сапрофитных видов. Поэтому при санитарно-микробиологических исследованиях учитывают только типичные коагулазопозитивные штаммы гноеродных стафилококков.

Реакция плазмокоагуляции. В пробирку с 0,5 см3 стерильной плазмы крови вносят одну бактериальную петлю агаровой али 0,1 см3 бульонной 18-24-часовой культуры испытуемого микроорганизма, инкубируют при 37°С и учитывают результат через 30 мин, 2,4 и 24 ч. При положительном результате образуется плотный или рыхлый сгусток. Если использовали разведенную плазму, то сгусток плавает в жидкости.

Приготовление плазмы. Используют кровяную плазму кролика цельную или разведенную физиологическим раствором 1:2 - 1:4. Взятую у кролика из сердца (в стерилъных условиях) около 10 см крови помещают в пробирку с 1 см 5%-го стерильного раствора лимоннокислого натрия, тщательно перемешивают, центрифугируют. Плазму (надосадочную жидкость) переносят в стерильные пробирки и хранят в холодильнике при +4-+6°С - 4-5 сут. Можно использовать для реакции плазмокоагуляции сухую кроличью плазму биофабричного производства

Стафилококки достаточно активны в биохимическом отношении. Они ферментируют ряд углеводов до кислоты без газа: маннит, лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу. Патогенные стафилококки разжижают желатин, свертывают, а затем пептонизируют молоко, вызывают гемолиз эритроцитов. Образуют сероводород, индол не выделяют. Продуцируют каталазу, уреазу, аммиак и водород. Патогенные стафилококки выделяют ряд ферментов: плазмокоагулазу, желатиназу, липовителлин, ДНК-азу, бета-лакталазу, фибринолизин, лизоцим и др., кроме того, выделяют энтеротоксин, лейкоцидин, токсин общего летального действия и др.

Среди неспорообразующих микробов стафилококки наиболее устойчивы к различным физическим и химическим факторам. В высушенных субстратах они сохраняются более 6 месяцев не теряя вирулентности, в пыли - 50-100 дней, в течение нескольких часов они выдерживают действие прямых солнечных лучей. Нагревание до 70°С выдерживают более 1 часа, при кипячении погибают мгновенно (за исключением энтеротоксина, выделяемого токсигенными штаммами стафилококков). В мясных хлебах погибают только при достижении в центре батона температуры 85-90°С. Низкие температуры подавляют жизнедеятельность стафилококков (их размножение и токсинообразование), но не убивают их. Так при -10 --18°С в тушках птиц стафилококки сохраняют свою жизнеспособность и токсигенность в течение 35 месяцев. 5%-й раствор фенола действует губительно после 30-минутного воздействия. Стафилококки чувствительны к анилиновым красителям (особенно к бриллиантовому зеленому) и некоторым антибиотикам. Резистентны к действию чистого этанола и к препаратам хлора.

Патогенные стафилококки обладают способностью продуцировать токсины: летальный, гемолитический, некротический, лейкоцидин, энтеротоксин. Кроме токсинов патогенные стафилококки вырабатывают ферментативные субстанции (фибринолизин, гиалуронидазу, плазмокоагулазу, лецитиназу), усиливающие действие токсинов на организм. Наиболее патогенен золотистый стафилококк, который выделяет экзотоксины, обусловливающие пищевые отравления. Стафилококк, образующий энтеротоксин, впервые был выделен из вымени коровы, больной маститом. Энтеротоксин термостабилен, не разрушается в течение 30 минут при 100?С, не утрачивает токсических свойств под действием формалина. При скармливании продуктов, содержащих токсины, котятам, крольчатам, белым мышам они быстро погибают.

Патогенные стафилококки содержат протеиновый и полисахаридный антигены. Протеиновый антиген, общий для всей группы стафилококков, обладает видовой специфичностью, он нетоксичен для животных. Полисахаридный антиген специфичен для различных типов стафилококков. Он содержит энтеротоксины A, B, C, D. Наиболее часто пищевые интоксикации вызывает энтеротоксин А («пищевой» - токсин), устойчивый к нагреванию. Энтеротоксин В («кишечный» - токсин) термолабилен, обусловливает возникновение энтеритов у детей, его часто обнаруживают в продуктах, вызывающих интоксикацию. Энтеротоксин С вызывает рвоту у обезьян, а энтеротоксин D - у кошек.

Патогенные стафилококки вызывают местные гнойные воспалительные процессы: фурункулы, абсцессы, флегмоны, маститы, нагноение раны. Из домашних животных к стафилококковой инфекции наиболее восприимчивы лошади, собаки, крупный и мелкий рогатый скот, свиньи; из лабораторных-кролики, белые мыши.

3. Источники обсеменения продуктов стафилококками

Чаще всего причиной стафилококковых токсикозов является употребление молока, мяса и мясных изделий, кондитерских изделий с заварным кремом и др., контаминированных патогенными стафилококками.

Органолептические свойства продуктов, в которых размножаются стафилококки и накапливаются энтеротоксины, не изменяются.

Основными источниками обсеменения стафилококками пищевых продуктов являются люди и животные с гнойно-воспалительными процессами (абсцессы, фурункулы, гнойные раны и др.), а также носители этих микроорганизмов. Перенос стафилококков от людей на пищевые продукта может происходить воздушно-капельным путем, при непосредственном контакте людей с продуктами, оборудованием, тарой и т.д., а также в процессе убоя скота и разделки туш.

В связи с тем, что основным источником обсеменения сборного молока стафилококками является молоко, полученное от коров, больных маститом, необходимо выявлять больных животных, особенно с субклиническими формами маститов, и не допускать смешивания маститного и сборного молока.

Источником обсеменения молока патогенными стафилококками могут быть люди с гнойничковыми поражениями кожи (фурункулами, абсцессами, нагноившимися ранами и царапинами), а также больные ангиной. Такие люди не должны допускаться к работе на пищевых предприятиях.

Энтеротоксигенные стафилококки размножаются в пищевых продуктах даже при содержании в них около 40% влаги. Они могут развиваться в продуктах, содержащих от 7% до 12% хлорида натрия. Сахар угнетает развитие стафилококков при концентрациях 30-40%. Некоторые микроорганизмы (В. сеreus, дрожжи из рода Саndidа и др.) оказывают на стафилококки стимулирующий эффект (они усиливают образование энтеротоксина).

При благоприятных температурных условиях энтеропатогенные стафилококки быстро размножаются в продуктах и продуцируют токсин (энтеротоксин). Пищевые токсикозы, вызванные энтеропатогенными стафилококками, протекают в форме острого гастроэнтерита, сопровождающегося рвотой, реже диареей, головной болью. Инкубационный период очень короткий - от 30 мин до 6 ч. Длится заболевание один, реже - два, три дня.

Энтеротоксин стафилококков обладает высокой термоустойчивостью. Инактивирование (разрушение) токсина происходит только через 2,5-3 часа кипячения. При автоклавировании (120°С) токсин разрушается через 20 мин.

4. Диагностика

Диагноз стафилококковых токсикозов ставят на основании клинической картины болезни и эпидемиологических данных.

Микробиологические исследования вспышек стафилококковых токсикозов ведется в следующих направлениях:

1. выделение возбудителя от пострадавших (из промывных вод желудка, рвотных масс, испражнений) и остатков пищевых продуктов; в случае выделения культуры стафилококка проводят идентификацию до фаговара;

2. определение в исследуемом материале (или выделенной культуры) энтеротоксина;

3. обнаружение источника инфицирования продукта или носительства среди людей, принимавших участие в приготовлении пищевого продукта, послужившего причиной отравления.

При отсутствии иммунных сывороток к стафилококковым энтеротоксинам можно поставить биологическую пробу на щенках собак или на котятах в возрасте 1-2,5 мес. Животным скармливают подозреваемый продукт или фильтрат выделенных культур стафилококков. Через 30-60 мин у животных наблюдаются симптомы гастроэнтерита: рвота, диарея, после прекращения которых животные выздоравливают.

При пищевых отравлениях исследуют остатки пищевых продуктов, рвотные массы, промывные воды и испражнения больных, преследуя две цели: выделение стафилококков и обнаружение энтеротоксина.

Для выявления патогенных стафилококков делают посевы в жидкую накопительную среду, содержащую 10-15% хлористого натрия. После 24-48-часового термостатирования проводят посев на МПА и идентифицируют патогенные стафилококки Дифференциацию патогенных и сапрофитных стафилококков проводят по способности вызывать коагуляцию плазмы и по чувствительности к бактериофагам.

В настоящее время выделено около 40 различных фаготипов стафилококков. Фаготипизирование имеет большое значение для дифференциации стафилококков и определения источников загрязнения продуктов. При дифференциации патогенных и сапрофитных стафилококков учитывают также пигментообразование, ферментацию маннита и гемолитические свойства. В качестве элективно-дифференциальных сред используют молрчно-солевой и кровяно-солевой агар. Чистую культуру стафилококков из фекалий, рвотных масс получают на среде Чепмена, которая содержит 7% хлористого натрия, кристалл-виолет, лактозу или на желточно-солевом агаре (ЖСА) с 10% поваренной соли в 10-20% желточной взвеси. Большая концентрация хлористого натрия подавляет развитие посторонней микрофлоры, но не препятствует росту стафилококков.

Наличие энтеротоксина в исследуемом материале устанавливают по реакции преципитации в агаре с моно-специфическими антиэнтеротоксическими сыворотками, а также по результатам биологической пробы. В лабораториях биологическую пробу ставят на котятах или щенках. Лабораторные животные погибают через 15-20 мин после внутривенного или внутрибрюшинного введения фильтрата бульонных культур или экстрактов из материала. У животных после скармливания остатков пищевых продуктов через 3-6 ч возникает рвота, диарея.

5. Выявление и определение количества стафилококков в пищевых продуктах

Выявление и определение количества этих микроорганизмов в пищевых продуктах проводят в соответствии с ГОСТ 10444.2-94. Для этого делают посев в жидкую селективную среду (с предварительным обогащением) и на агаризованные селективно-диагностические среды. Посев делают в жидкие среды, если в навеске менее 150 (15) колониеобразующих единиц (КОЕ), и на плотные среды, если в навеске (объеме) более 150 (15) КОЕ.

При содержании в 1 г твердого продукта менее 1 500 КОЕ (или в 1 см3 жидкого продукта менее 150 КОЕ) определяют наиболее вероятное число (НВЧ) посевом в жидкую селективную среду. При подозрении на наличие в 1 г (1 см3) жидкого продукта более 1500 (150) КОЕ этого вида микроорганизмов посев проводят на плотные селективно-диагностические среды.

Методы выявления и определения НВЧ S.aureus с предварительным обогащением предусматривают высев навески продукта и (или) ее разведений в жидкую селективную среду, инкубирование посевов, пересев на агаризованные селективно-диагностические среды, подтверждение по биохимическим признакам принадлежности выделенных культур к S.aureus.

Выявление и определение количества S.aureus с использованием агаризованных селективно-диагностических сред включают следующие стадии: высев навески или разведения навески продукта; инкубирование посевов; подсчет колоний с характерными для S.aureus признаками; идентификацию выделенных культур.

Из навески продукта готовят исходное и ряд 10-кратных разведений так, чтобы можно было определить в 1 г (см3) продукта предполагаемое или указанное в нормативно-технической документации количество S.aureus Степень разведения навески для посева на плотные среды выбирают такой, чтобы общее количество колоний, выросших на чашке Петри, было в пределах 15-300, а в жидких средах, чтобы хотя бы в одной пробирке с наибольшим разведением отсутствовали микроорганизмы.

При определении количества S.aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды по 0,1 или 0,2 см3 продукта (или его разведения) наносят на поверхность агара Байрда-Паркера, молочно-солевого, яично-желточно-азидного или яично-желточно-солевого агара в двух чашках.

Страницы: 1, 2



Реклама
В соцсетях
рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать