Методы биохимических исследований

Методы биохимических исследований

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ

ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ В.Г. БЕЛИНСКОГО

Принято

на заседании Ученого совета естественно-географического факультета

протокол заседания совета факультета

№ ___от «___» _________2007 г.

Декан

факультета _____________Н.А. Кагина

УТВЕРЖДАЮ

Проректор по учебной работе

_________________М.А. Пятин

«___» _________2007 г.

ПРОГРАММА УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ

Методы биохимических исследований

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 020208-«Биохимия»

Факультет естественно-географический

КАФЕДРА биохимии

Пенза - 2007

1. Квалификационные требования

Квалификация выпускника - биохимик.

Нормативный срок освоения основной образовательной программы подготовки биохимика по специальности 020208 Биохимия при очной форме обучения 5 лет.

Квалификационная характеристика выпускника

Специалист-биохимик осуществляет деятельность по изучению строения и свойств химических соединений, входящих в состав живых организмов, метаболизма и его регуляции. Разрабатывает нормативные документы в своей области деятельности, организует и выполняет экспедиционные работы и лабораторные исследования; анализирует получаемую полевую и лабораторную информацию, обобщает и систематизирует результаты выполненных работ, используя современную вычислительную технику; составляет научно-технические отчеты и другую установленную документацию; следит за соблюдением установленных требований, действующих норм, правил и стандартов в области своей деятельности. Проводит экспериментальные исследования в своей области, формулирует их задачу, участвует в разработке и осуществлении новых методических подходов, обсуждении, оценке и публикации результатов, проводит патентную работу, участвует в работе семинаров и конференций, составлении патентных заявок.

В производственных и медицинских организациях проводит биохимическую аналитическую работу, участвует в диагностике и экспертизе, сертификации продуктов производства.

Исходя из своих квалификационных возможностей, специалист-биохимик подготовлен к самостоятельной работе на должностях биохимика, врача-лаборанта, биолога, лаборанта-исследователя, инженера-исследователя, научного сотрудника в научно-исследовательских и научно-производственных учреждениях, и других должностях, в соответствии с требованиями Квалификационного справочника должностей руководителей, специалистов и других служащих, утвержденных постановлением Минтруда РФ от 21.08.98 № 37.

Специалист-биохимик подготовлен к педагогической деятельности на должности преподавателя в средней школе и учреждениях профессионального образования при условии освоения дополнительной образовательной программы психолого-педагогического профиля.

Область профессиональной деятельности

Исследование строения и физико-химических свойств химических соединений, входящих в состав живых организмов, метаболизма и молекулярных механизмов его регуляции.

Объекты профессиональной деятельности

Вирусы и микроорганизмы, клеточные органеллы и одиночные клетки, многоклеточные организмы (растения и животные).

Виды профессиональной деятельности

· Проведение научных исследований в области биохимии и молекулярной биологии: сбор и подготовка научных материалов, квалифицированная постановка экспериментов, обработка результатов клинических анализов и экспериментальных исследований.

· Научно-производственная и организационная деятельность;

· Педагогическая деятельность (при условии освоения соответствующей образовательно-профессиональной программы педагогического профиля) преподавание в средней и высшей школе, осуществление просветительской деятельности.

· Иные виды деятельности, позволяющие использовать базовую биологическую подготовку и подготовку по специальности 020208 - Биохимия.

2. Требования ГОС по дисциплине

Методы препаративной химии и биохимии; методы выделения органелл; разные виды хроматографии, в том числе аффинная хроматография; разные виды электрофореза, в том числе иммунный электрофорез; методы дифференциального центрифугирования, спектральные методы; методы меченых атомов; методы химической модификации белков и мембран; программирование и др.

3. Цели и задачи дисциплины

Курс «методы биохимических исследований» должен ознакомить студентов с основными методами исследований, используемых в биохимии.

Целью курса является подготовка высококвалифицированных биохимиков, способных выполнять исследования, самостоятельно планировать ход работы и подбирать необходимые методы для решения конкретных задач.

«Методы биохимических исследований» - это лекционный курс.

В курсе «методы биохимических исследований» изучаются теоретические основы биохимических методов исследований, основные методологические и методические приемы, необходимые для успешного применения этих методов. Особое внимание в курсе отводится современным хроматографическим и электрофоретическим методам исследований, видам современного лабораторного оборудования и приемам работы с ним.

Успешное освоение курса «методы биохимических исследований» подготовит студентов к проведению научных исследований в области биохимии и молекулярной биологии.

4. Место дисциплины в профессиональной подготовке студентов

Дисциплина методы биохимических исследований относится к специальным дисциплинам и дисциплинам специализации федерального компонента.

Распределение времени, отведенного на изучение дисциплины по учебному плану

Форма учебной работы

Форма обучения

Очная

По семестрам

7

8

Общая трудоёмкость, всего часов

36

44

Аудиторные занятия (АЗ)

17

22

Лекции (Л)

17

22

Практические занятия (ПЗ)

Семинары (С)

Лабораторные занятия (ЛЗ)

Другие виды аудиторных занятий

Самостоятельная работа (СР)

19

22

Контрольная работа

Компьютерное тестирование

Курсовая работа

+

Форма итогового контроля

(зачет, экзамен)

экзамен

Тематические планы для очной формы обучения на 7 семестр

№ п/п

Темы

Кол-во часов

Лекций

Самост.

1.

Оборудование биохимической лаборатории. Общие принципы биохимического исследования.

2

2

2.

Разрушение клеток и экстракция. Центрифугирование.

2

2

3.

Разделение белков путем осаждения. Осаждение нуклеиновых кислот.

3

3

4.

Буферные растворы и специальные добавки. Ультрафильтрация. Диализ. Детергенты и их применение.

2

2

5.

Общие принципы хроматографии, классификация хроматографических методов.

2

2

6.

Материалы матриц сорбентов и обменников. Техника колоночной хроматографии.

2

2

7.

Адсорбционная и распределительная хроматографии.

2

2

8.

Тонкослойная хроматография.

1

2

9.

Ионообменная хроматография.

1

2

Итого:

17

19

На 8 семестр

№ п/п

Темы

Кол-во часов

Лекций

Самост.

1.

Ионообменная ЖХВД белков. Хроматофокусирование.

1

1

2.

Аффинная хроматография.

2

2

3.

Гель-фильтрация.

3

3

4.

Теоретические и методические основы электрофореза.

3

3

5.

Изоэлектрическое фокусирование и изотахофорез.

2

2

6.

Обнаружение, количественное определение и характеристика
макромолекул после электрофореза.

2

2

7.

Принцип иммунного электрофореза. Иммунофиксация.

1

1

8.

Электросинерез. Электроиммуноанализ. Перекрестный иммуноэлектрофорез.

1

1

9.

Методы меченых атомов.

2

2

10.

Спектрофотометрические методы анализа.

2

2

11.

Флюориметрические методы анализа.

1

1

12.

Иммуноферментный анализ

1

1

13.

Радиометрический анализ. Масс-спектроскопия.

1

1

Итого:

22

22

Содержание дисциплины

1. Введение

История развития методов биохимических исследований. Роль методического обеспечения в развитии биохимии. Классификация методов исследования в биохимии. Применение биохимических методов в медицине, биотехнологии, экологии и др. отраслях

2. Методы препаративной химии и биохимии

Особенности биологических макромолекул как объектов исследования: высокая молекулярная масса, денатурация, полиэлектролитная природа, низкая скорость диффузии.

Оборудование биохимической лаборатории, специальные материалы и реактивы. Отделение осадков и нерастворимых веществ. Центрифугирование. Ультрафильтрация. Некоторые приемы, используемые при работе с белковыми растворами. Диализ.

Разделение белков путем осаждения. Общие положения. Растворимость белков при низкой концентрации солей. Высаливание при высокой концентрации соли. Осаждение белков органическими растворителями. Осаждение белков органическими полимерами и другими веществами. Осаждение вследствие избирательной денатурации. Осаждение нуклеиновых кислот. Кристаллизация белков.

3. Методы выделения органелл

Приготовление экстракта. Исходный материал. Особенности различных видов живых организмов в качестве исходного материала биохимических исследований. Свежесть сырья и его хранение.

Разрушение клеток и экстракция. Способы разрушения клеток. Растворы, используемые для экстракции. Буферные растворы и специальные добавки. Оптимизация и осветление экстракта. Особенности приготовления экстрактов растительных тканей и микроорганизмов.

Методы, используемые при очистке белков, ассоциированных с частицами. Детергенты и их применение.

4. Методы дифференциального центрифугирования

Центрифуга, ее устройство. Силы, действующие на частицу в роторе центрифуги. Скорость осаждения частиц. Константа седиментации. Раздельное осаждение частиц. Дифференциальное центрифугирование. Центрифугирование в градиенте плотности. Методы получения ступенчатых и непрерывных градиентов плотности.

5. Хроматография

5.1. Классификация и элементы теории хроматографии

Классификация хроматографических методов. Классификация по принципу фракционирования. Классификация по способу элюции. Классификация по расположению неподвижной фазы.

Элементы теории хроматографической элюции. Хроматографический процесс. Хроматографическая зона. Концепция теоретических тарелок. Кинетическая теория хроматографии. Разрешение близко мигрирующих зон. Оптимизация условий фракционирования. Градиентная элюция. Хроматография макромолекул.

5.2. Материалы матриц сорбентов и обменников

Целлюлоза. Гели на основе декстрана (сефадексы). Агароза. Полиакриламидный гель. Сефакрилы. Ультрогели. Полистирольные смолы. Полиамидные смолы. Кизельгур (целит, диатомовая земля). Силикагель. Окись алюминия. Пористое стекло. Оксиапатит.

5.3. Техника колоночной хроматографии

Хроматография при низком давлении. Хроматографические колонки. Резервуары для элюента. Смесители. Внесение препарата в колонку. Перистальтические насосы. Детекторы. Коллекторы фракций. Вспомогательное оборудование.

Хроматография при высоком давлении. Колонки. Внесение препарата. Задание градиента элюции. Детекторы.

Хроматография при умеренном давлении.

5.4. Гель-фильтрация

Общая характеристика метода. Принцип метода. Коэффициенты распределения. График селективности. Эффективность фракционирования.

Характеристика продажных матриц.

Методические особенности гель-фильтрации при низком давлении. Подготовка матрицы. Набивка колонки. Проверка качества набивки. Определение V0. Внесение препарата. Поддержание рабочего режима. Регенерация колонки.

Выбор параметров хроматографического процесса. Выбор матрицы. Размеры колонки. Выбор элюента. Скорость элюции. Оптимизация условий эксперимента.

Области применения. Очистка и фракционирование макромолекул. Определение молекулярной массы белка. Обессоливание и смена буфера.

Гель-фильтрация при высоком давлении. Гель-фильтрация в тонком слое.

5.5. Распределительная хроматография

Принцип метода. Нормальнофазовая распределительная хроматография. Распределительная хроматография в обращенных фазах.

Обратнофазовая гидрофобная хроматография при низком давлении. Немодифицированная сефароза. Элюция снижающимся градиентом концентрации соли. Гидрофобизированные гели агарозы.

Распределительная хроматография при высоком давлении.

5.6. Адсорбционная хроматография

Принцип метода. Сорбенты. Приготовление оксиапатита. Сорбционные свойства оксиапатита. Сорбция белков. Сорбция нуклеиновых кислот. Некоторые особенности хроматографии на оксиапатите. Фракционирование и очистка белков. Фракционирование и очистка нуклеиновых кислот. Разделение двунитевой и однонитевой ДНК. Очистка гибридов ДНК-РНК.

5.7 Ионообменная хроматография

Принцип метода. Компоненты хроматографической системы. Ионообменники. Элюент. Хроматографируемые вещества. Хроматографический процесс. Ионные взаимодействия вещества и сорбента. Управление силой ионного взаимодействия. Неионные взаимодействия вещества и сорбента.

Страницы: 1, 2



Реклама
В соцсетях
рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать рефераты скачать