гетероауксина сходно с действием ядов-разобщителей. С другой стороны, в
ряде работ показано, что ауксины активируют превращение в системе АТФ/АДФ.
Гетероауксин, усиливая потребление макроэргических связей в АТФ,
используемых на процессы роста, увеличивает отношение АДФ к АТФ,
результатом чего и является активирование аэробного дыхания.
В пользу этого предположения свидетельствуют опыты, в которых при
искусственном подавлении роста не проявлялось и стимулирующее действие
гетероауксина на дыхание.
Изучение непосредственного действия гетероауксина и гибберелина на процессы
окислительного фосфорилирования в изолированных митохондриях, проведенное
Якушкиной и сотр., показало, что под действием гетероауксина сопряжение
дыхания и фосфорилирования возрастает, повышается количество
макроэргического фосфора в АТФ и АДФ (табл. 1).
Изложенный материал показывает, что существует ряд противоположных
мнений о первичных механизмах действия ростактивирующнх веществ, и в
частности ауксина. Вопрос о последовательности действия ауксина на
энергетические и синтетические процессы нельзя считать окончательно
решенным. Имеются, наконец, наблюдения, что гетероауксин изменяет
«качество» дыхания, в частности под его влиянием происходит активация
дегидрогеназ апотомического цикла.
В ряде работ подчеркивается, что с уровнем энергетических процессов связана
не только интенсивность, но и направление роста, например знак и величина
геотропической реакции.
Наряду с использованием энергии новообразование элементов структуры
растения в процессах роста связано с затратой пластических веществ. С этой
точки зрения представляется весьма важным вопрос о соотношении между
количествами органических соединений, потребляемых на дыхание, с одной
стороны, и на новообразование клеток — с другой.
В исследовании с изолированными зародышами кукурузы, выращенными в
стерильных условиях, было найдено, что из трех молей потребленной ими
глюкозы два моля затрачивались на построение новых клеток и один моль — на
дыхание. Отношение 2 : 1 было максимальным, и оно отмечалось у пятидневных
зародышей. .В другие сроки наблюдений это отношение было менее
благоприятным.
Наблюдения над молодыми проростками риса показали, что у этого объекта
синтетический эффект составляет примерно 50%, т. е. на каждую единицу вновь
образованных сухих веществ затрачивалось такое же количество пластических
соединений на дыхание.
Наиболее высокий коэффициент использования в синтетических целях характерен
для соединений, содержащих ацетильные, радикалы, для органических кислот
цикла Кребса и некоторых других. В особенности продуктивно клетка
использует в синтетических целях пировиноградную кислоту, около половины
углерода которой может быть обнаружено в составе сухих веществ мезокотиля
проростков кукурузы.
Таблица 1
Влияние регулятора роста на окислительное фосфорилирование при обработке
изолированных митохондрий стеблей гороха
(по Г. М. Живухиной и Н. И. Якушкиной, 1966 г.)
|О |Р |Р/О |
конт роль |индолил-уксусная кислота |гиббере-линовая кислота |контроль
|индолил-уксусная кислота |гибберелиновая кислота |контроль |индолил-
уксусная кислота |гиббере-линовая кислота | |0,94 1,80
1,82 |1,35 2,10 2,40 |2,0 2,55 1,92 |0,68 0,91 1,04 |2,03 1,80 3,68
|2,03 1,80 1,33 |0,73
0,51 0,61 |1,50
0,87 1,53 |1,0 1,07
0,69 | |
ДЫХАНИЕ КЛЕТОК НА РАЗНЫХ ФАЗАХ РОСТА.
ИЗМЕНЕНИЯ ДЫХАНИЯ С ВОЗРАСТОМ ТКАНЕЙ
Совершенствование методов исследования сделало возможным изучение дыхания
отдельных микроскопических участков тканей и облегчило выяснение значения
фазы роста клеток для характера дыхательного процесса. Уже первые
исследования, проведенные в этом направлении, дали ряд интересных и
неожиданных результатов: оказалось, что не всегда более молодые клетки
дышат интенсивнее, как можно было ожидать на основе данных, полученных при
грубом сравнении дыхания органов разного возраста.
Дыхание меристематических тканей растений отличается рядом своеобразных
особенностей. Это впервые показали Рулянд и Рамсгорн (1938), изучая
дыхательный газообмен различных меристем (кончики корней бобов, камбий
сирени и липы). Эти ученые обнаружили, что этим тканям свойственно аэробное
брожение, т. е. наряду с кислородным дыханием в них осуществляется процесс
спиртового брожения. Оказалось, что в камбии и кончиках корней содержится
небольшое количество этилового спирта и уксусного альдегида. Дыхательный
коэффициент этих тканей оказался повышенным и иногда достигал нескольких
единиц
Как видно из приведенных данных, поглощение кислорода в меристемах
значительно меньше по сравнению с клетками, перешедшими к растяжению или
закончившими рост. Дыхательный коэффициент в камбии и кончиках корней
всегда выше единицы и обычно резко уменьшается при переходе к зоне
растяжения вследствие усиления поглощения кислорода.
При расчете на единицу белкового азота цифры поглощения кислорода были бы
еще ниже по сравнению с другими тканями.
Увеличение меристематической активности (ускорение клеточных делений), что
достигалось в исследованиях Рулян-да и Рамсгорна воздействием
гетероауксина, приводит к еще более высоким величинам ДК, обусловленным
снижением поглощения кислорода. Одновременно при применении стимулятора
увеличивается накопление продуктов спиртового брожения.
Г. Ваннер (1950) и др., изучая дыхание в разных срезах корней пшеницы,
обнаружили, что в зоне растяжения при расчете на единицу белкового азота
кислорода поглощается почти в три раза больше, чем в меристематической
зоне. Это позднее было подтверждено опытами Л. Элиассона , 1955). Ваннер,
1950) получил подобные результаты для корней лука, Г. Балдовинос (, 1953) и
Д. Р. Годдард и Б. Дж. Меуз (, 1950) — для корней кукурузы. Годдард и Меуз
обнаружили, что в меристематической зоне корней интенсивность дыхания при
расчете на единицу азота низкая, в зоне растяжения она сильно возрастает и
достигает максимума, а после прекращения роста снижается до постоянного
уровня. Р. Броун и Д. Броадбент ,( 1950) не нашли столь значительных
различий в интенсивности дыхания разных зон роста корней гороха. Таким
образом, переход клетки от эмбрионального состояния к фазе растяжения
обычно связан со значительным активированием кислородного дыхания. Причина
этих изменений дыхания пока остается неясной. Некоторые исследователи
считают, что более интенсивное дыхание зоны растяжения является следствием
того, что эта фаза роста клеток помимо поглощения воды, накопления
осмотически активных веществ и роста клеточных оболочек связана также с
интенсивным новообразованием цитоплазмы (Броун и Броадбент, 1950 и др.).
С приведенными данными вполне согласуются наблюдения над влиянием
парциального давления кислорода на распускание древесных почек: у некоторых
деревьев, например у каштана, почки скорее трогаются в рост при пониженном
содержании кислорода — до 2—5об.%. Многие способы ранней выгонки связаны с
временным усилением анаэробных процессов.
Смирнов (1943), изучая дыхание зерна пшеницы при разной влажности, нашел,
что дыхательный коэффициент сухого зерна выше; он относил это за счет
дыхания зародыша. Особенности дыхания растительных меристем интересно
сопоставить с данными, характеризующими обмен веществ на разных фазах
митотического деления клеток. Штерн (1959) считает, что митоз можно
отнести к числу немногих функций, осуществление которых в клетках,
нормально являющихся аэробными, частично или полностью возможно в
отсутствие кислорода. У аэробных организмов во многих случаях, хотя и не
всегда, доступ кислорода является существенным условием, способствующим
митозам, но даже в случае наличия потребности в кислороде эта
потребность снимается перед окончанием профазы, а у некоторых клеток и
при вхождении в профазу, после чего до самого завершения митотического
цикла клетки не нуждаются в доступе кислорода (В. С. Буллоу—
1952). В этом отношении наблюдается неоднородность реакций даже
среди аэробных клеток: у некоторых потребность в кислороде
обнаруживается только на протяжении части профазы, у других—вся профаза
проходит без кислорода, а у некоторых клеток уже перед началом профазы эта
потребность утрачивается.
Варбург (1956) высказывал предположение, что причина рака заключается в
нарушении дыхательных систем, приводящих к нарушению дифференциации тканей
при сохранении высокой активности митозов. Действительно, для многих
опухолей характерно наличие интенсивного гликолиза при слабом дыхании (см.
сводку Штерн, 1959). Однако Штерн считает, что возникновение подобных
аномалий обмена чаще является следствием, чем причиной канцерогенезиса.
Неодинаковое отношение к кислороду митотического процесса у разных клеток
пока еще не получило своего объяснения. Некоторые исследователи
предполагают, что здесь может сказываться конкуренция в потреблении
кислорода разными клеточными органоидами, изменяющаяся при дифференциации
тканей (Штерн, 1959). Благоприятное влияние дыхания на митотические
движения отмечалось многими, оно возникает вследствие образования богатых
энергией соединений, прежде всего АТФ. Однако пока еще неясна
роль образуемой при дыхании АТФ в процессе разделения хромосом. Если
бы гликолиз не прекращался во время митоза, то он один был бы способен
обеспечить энергией этот процесс, как предполагает Браше (1955 и
др.). Однако пока еще нельзя считать доказанным, что
гликолитический механизм остается активным на протяжении всех
этапов митоза; имеется ряд фактов, говорящих об обратном. Например,
микроспоры во время митотического интервала обладают очень слабой
способностью вызывать распад сахара ферментами, катализирующими
первичные реакции гликолиза, хотя в другое время эти ферменты у них очень
активны.
В пыльниках лилейных во время деления ядер наблюдается резкое падение
потребления кислорода в микроспороцитах и микроспорах, что подтвердилось и
в опытах с суспензиями микроспор (Р. О. Эриксон— 1947; Штерн и П. Л. Кирк —
1948 и др.). В синхронно делящейся культуре обнаружено прекращение
поглощения кислорода во время деления клеток. Однако подобное явление
наблюдается не всегда: у морских ежей нет подобного резкого снижения
потребления кислорода клетками в момент деления, что, вероятно, связано с
большой массой цитоплазмы у их яйцеклеток (Штерн, 1956, 1959).
Предполагается, что нарушения синтетических процессов во время
митотического деления клеток являются следствием временного ослабления
активности аэробных систем, имеющих значение в образовании богатых энергией
соединений. Для объяснения сравнительно малой потребности митотического
процесса в снабжении энергией существуют разные предположения. Как уже
упоминалось, существует точка зрения Варбурга, заключающаяся в том, что
гликолиз может служить единственным источником энергии для митоза. Буллоу
(1952) -предполагает, что до наступления митоза предварительно создается
резервуар энергии за счет аэробных процессов. Штерн (1959) считает, что
дезорганизация ядра во время митоза каким-то образом прекращает
функционирование митохондрий. Это пока трудно достаточно ясно истолковать
потому, что здесь было бы неправильно полагаться на аналогии с влиянием
удаления ядра в опытах Браше (1955 и др.). Изменения состояния клетки и ее
отдельных органоидов во время митоза своеобразны и трудно сравнимы со
всякими другими состояниями, искусственно вызываемыми при выделении
безъядерных фрагментов и т. д.
Для деления клеток характерны понижение окислительно-восстановительного
потенциала и высокий уровень восстановленности, что было замечено для
эмбриональных тканей животных (Вюрмзер, 1935 и др.), а также для
растительных меристем, которым, присущи спиртовое брожение, высокий
дыхательный коэффициент и сравнительно невысокая интенсивность
поглощения кислорода (Рулянд и Рамсгорн, 1938; Ваннер, 1950; Элиассон,
1955 и др.). Здесь, вероятно, имеет значение характер биосинтезов,
происходящих хотя и не в период самого деления клетки, а, по-видимому, во
время интерфазы, но без совершения которых не может осуществляться
митотический процесс. Имеется в виду синтез ядерной нуклеиновой
кислоты — дезоксирибонуклеиновой (ДНК), содержание которой должно
удвоиться, иначе не может происходить деление. ДНК характеризуется высоким
уровнем восстановленности: в состав ее нуклеотидов входит
дезоксирибоза — пентоза, отличающаяся от рибозы при равном числе
водородных атомов меньшим числом кислородных. Кроме того, в
отличие от РНК, ДНК имеет в своем составе тимин (вместо урацила
в РНК), который отличается от урацила большим числом метальных групп.
Высокий уровень восстановленности говорит о необходимости больших затрат
энергии на синтез ДНК. Кроме того, самый характер биосинтеза ДНК
требует предварительного аккумулирования значительных количеств энергии
макроэргических связей, которые могли бы обеспечить этот синтез
своевременно и быстро. Действительно, имеющийся фактический материал,
характеризующий условия, влияющие на деление клеток, показывает, что для
интенсивного деления их необходима высокая активность процессов,
способных обеспечить запасание энергии макроэргов. У растений все
условия, способствующие фотосинтетическому или дыхательному
фосфорилированию, благоприятствуют интенсивному делению клеток,
высокой активности меристем. Наоборот, все факторы, угнетающие
энергетические процессы: недостаток света, недостаток фосфора при избытке
азота, воздействие специфическими ингибиторами дыхательных
ферментов, или ингибиторами фосфорилирования, высокими
концентрациями ауксинов, угнетающими фосфорилирование, и т. д.,
приводят к торможению деления клеток, уменьшая синтез ДНК. Следствием
подобных условий является обычно увеличение отношения РНК/ДНК при
снижении общего содержания нуклеиновых кислот (Туркова и др., 1960 и др.).
Интересны данные по изучению относительной активности пентозофосфатного
распада глюкозы в тканях разного возраста.
Джиббс и Биверс провели определение величины С6/С1 дыхания растительных
тканей разного возраста (1955). Интересно, что только кончики корней давали
близкие к единице величины С6/С1, а по мере удаления от них наблюдалось все
большее уменьшение этой величины, т. е. у более старых частей корня
анаэробная фаза дыхания менее выражена и начинает преобладать путь прямого
окисления. Это подтверждает представления о сильно выраженном гликолизе в
активных меристемах растений, в частности в кончиках корней.
Джиббс и Биверс в стеблях и листьях различных растений также обнаружили,
что по мере старения тканей возрастает доля участия в дыхании
«апотомического» распада глюкозы. В этой работе для листьев и стеблей были
получены менее высокие цифры изучаемого отношения, чем для корней. Во всех
случаях наблюдается одна и та же закономерность: усиление прямого окисления
глюкозы при старении.
Вместе с изменениями в дыхательном газообмене, сопровождающими рост клеток,
и в характере путей распада глюкозы обнаружены изменения и в ферментных
системах, участвующих в дыхании. Исследованиями В. Кемпвера (1936), Д. Р.
Годдарда (1944) и др. было установлено наличие цитохромной системы в
эмбриональных тканях растений: зародышах семян и др.
П. В. Марш и Годдард ,( 1939) обнаружили, что листья разного возраста
обладают качественно различными дыхательными системами. Анализируя листья
моркови, они наблюдали, что наружные листья розетки мало чувствительны к
действию цианидов, азида натра и окиси углерода, средняя часть — уже более
чувствительна, а дыхание самых молодых, внутренних, листьев розетки, еще не
прекративших рост, почти полностью подавляется этими ингибиторами. Отсюда
был сделан вывод, что при старении листьев увеличивается роль дыхательных
ферментов, не содержащих тяжелых металлов. В то время считалось, что
флавиновые ферменты не содержат металлов и что поэтому они не ингибируются
ядами металлосодержащих оксидаз.
Михлин и П. А. Колесников (1947) провели обстоятельные исследования
изменения в дыхательных системах зародыша за период до 6-недельного
возраста у нескольких растении из разных семейств: ячменя, табака, свеклы,
цикория. Основными методами изучения окислительных систем служили: 1)
применение специфических субстратов, 2) использование специфических
ингибиторов и 3) спектроскопические исследования.
Цитохромную систему Михлив и Колесников обнаружили в изолированных
зародышах, в проростках и корешках ячменя, в листьях табака
(сорт Дюбек). В незеленых частях ячменя цитохром с нашли
спектроскопически. В суспензии из 10-дневных проростков ячменя удалось
обнаружить лишь следы цитохрома. О присутствии в зародышах и
проростках ячменя цитохромоксидазы можно было судить по поглощению
кислорода суспензией после прибавления к ней цитохрома с и гидрохинона .
Предварительные опыты с изолированными препаратами показали, что для
цитохромоксидазы преимущественным субстратом из полифенолов является
гидрохинон, а для полифенолоксидазы — пирокатехин.
Результат опыта показал: влияние добавления цитохрома падает с возрастом
ткани: у зародышей оно таково, что увеличение поглощения кислорода
возрастает в несколько раз, у проростков оно значительно меньше и заметно
падает с каждым днем. Спектроскопические исследования подтвердили
результаты опытов с добавлением цитохрома и гидрохинона; это дало право
Михлину (1947, 1956) считать, что после 5—6 дней роста ячменя цитохромная
система заменяется какой-то другой. В надземных частях ячменя Михлину не
удалось обнаружить наличие полифенолоксидазы; прибавление пирокатехина
оказывало только тормозящее действие на дыхание. В листьях же цикория и
свеклы была установлена высокая активность полифенолоксидазы.
После отравления цианидом у зародышей и корней ячменя в опытах Михлина и
Колесникова наблюдалось значительное «остаточное» дыхание, величина
которого оказалась гораздо большей у нерастертых листьев 20-дневного
возраста. Таким образом, при развитии ячменя цитохромная система в его
тканях постепенно заменяется другой, мало чувствительной к цианидам и, как
оказалось в других опытах, совсем не угнетаемой окисью углерода.
Инфильтрованные в листья ячменя аминокислоты, в-оксимасляная кислота,
глицериновый альдегид и гипоксантин окисляются даже в присутствии цианидов.
Все это позволило авторам считать, что дыхание листьев ячменя
осуществляется при активном участии флавиновых ферментов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Рубин Б.И. и Ладыгина М.Е. Физиология и биохимия дыхания.-М.: Наука,
1974г.
2. Туркова Н.С. Дыхание растений. М. Изд-во Моск. ун-та, 1963г.
3. Куперман И.А., Хитрово Е.В. Дыхательный газообмен как элемент
продукционного процесса растений. - Новосибирск: Наука, 1977г.
4. Полевой В.В. Физиология растений. 1989г.
Страницы: 1, 2
